2022/10/09 / 公司活动及新闻
RNA pull down技术应用
RNA pull down技术应用
2022/10/09
LncRNA功能形式广泛,可与蛋白质、DNA和RNA相互作用,参与各种生物过程的调节。主要包括基因组表观遗传装饰、调节转录后翻译、发挥作用ceRNA,增强子RNA对细胞增殖、分化、转移、凋亡、免疫等起到调节作用。
lncRNA通过调节肿瘤细胞糖代谢、谷氨酰胺代谢和脂质代谢的重要环节,增加葡萄糖摄入、谷氨酰胺分解和脂质生成,促进肿瘤的发生和发展。目前,大多数lncRNA肿瘤细胞能量消耗中的功能和调节机制尚不完全清楚,进一步了解和了解肿瘤细胞的功能和调节机制lncRNA能量消耗异常的恶性生物学行为将有助于为肿瘤的诊断和治疗提供有效的证据和新的思路和方法。
环形RNA(circularRNA,circRNA)这是一种特殊的长链非编码研究,最近非常流行RNA。研究表明,circRNA在人体细胞中,水平具有调节基因表达的重要功能,参与各种肿瘤等疾病的病理发展。
circRNA大多由外显子序列组成,呈闭环结构,特性稳定,高度保守,通过细微的显子序列,具有闭环结构,特性稳定,高度保守RNA“海棉”对靶基因表达的作用调节,与肿瘤的发生、发展有关。这些特征使这些特征成为目标。circRNA有潜力成为新的肿瘤分子诊断标志物。通过竞争与肿瘤相关的细微肿瘤。RNA整合可以针对开发circRNA针对分子靶点的靶向治疗药物。circRNA肿瘤转化医学研究具有重要意义。
研究多种人类疾病
RBPs转录后参加调控mRNA稳定性,LncRNA许多生物学过程,如活性、应激、肿瘤发生发育、细胞坏死等,与许多人类疾病密切相关。因此,对于这个问题,RBPs-RNAs相互作用网络的研究和鉴定具有重要意义。但由于它的原因。RBPs对其进行复杂、功能多样性、作用空间位置多样化等因素,对其进行精准研究一直是一个重大挑战。RNA领域,尤其是非编码RNA探索的快速发展催生了各种探索RBPs-RNAs相互作用鉴定技术。
RNApull-down常见的试验问题
RNA蛋白质的亲和力不够
可能的原因:1)结合缓冲环境没有改善;2)裂解不完全;3)磁珠消耗不足;4)RNA探针用量不足
解决方法:1)提高孵化时间、温度、盐浓度等条件;2)增加裂解液与蛋白质样量的比例;3)增加裂解液;4)增加磁珠或探针的用量;5)确定生物素和涟霉亲和素的效率
RNA没有结合蛋白
可能的原因:1)靶蛋白量不足;2)缓冲系统错误;3)RNA探针与蛋白质的亲和力很低
解决方法:1)增加上样蛋白量;2)应用低盐系统;3)添加交联试剂;
WB信噪比高
可能的原因:1)阳性信号率低;2)一抗效率低;3)蛋白质没有完全卖解
解决方法:1)增加抗性;2)使用敏感化学发光液;3)用细胞裂解液预孵-抗;4)增加样品量;5)确定是否有其他可能的组合;6)增加裂解液的用量
组合非特异性高
可能的原因:1)缓冲环境没有改善;2)缓冲环境严谨性低;3)样品没有完全裂解,裂解系统没有改善
处理方案:1)提高孵化时间、温度、盐浓度等条件;2)采用严谨性高的缓冲系统;3)减少RNA探针与样品的比例;4)提高裂解液量