质粒常用于我们的细胞实验DNA，现在使用剂盒非常方便，而且菌体培养后，可以多管浓缩提取，提到质粒量多，可以-20℃储存后用于酶切.转换等试验，可以提前跑胶，只要不降解，就可以继续使用，防止每次使用，都要再培养再提取。
质粒DNA的提取
质粒多为双链.环形的DNA分子独立于细菌染色体**以及遗传的辅助遗产**位置。质粒是生物学实验操作、遗传工程改良物种等最重要的工作DNA媒介。
实验步骤
1.摇菌培养
1)将鉴定测序正确的复制菌液涂涂抹LB固态平板。
2）置于37℃恒温培养箱，培养12-17h，待生长菌体。
3）杀菌15ml5加入离心管ml含抗生素的LB液体培养基，编号标记。
4)选择单克隆菌团放置液体培养基，每个培养液放置一个菌落。
5）37℃，180rpm，震荡训练过夜。
2.获得细菌并裂化
1)离心扩增菌液，按说明书将菌液重悬，转至1.5ml离心管内。
2)用少量质粒提取试剂盒，按说明书要求提取质粒。
3)细菌高速离心1min,完全去除上清。
4）加入250ulRB溶液，振荡器充分悬浮细菌。
5）加入250ulLB溶液。立即上下颠倒10次，使细菌裂化，室温，放置2次min。
6）加入250ulNB溶液。立即上下颠倒10次，使其充分中和，室温，放置2次min。
7）室温，1500rpm，高速离心15min。
8)将吸附柱放入收集管中，离心得到的上清转移到吸附柱、室温、1.5万rpm，高速离心30s。
9)废水，将吸附柱放入收集管中，加入700ulWB溶液进入吸附柱，1.5万rpm，高速离心30s。
10)重复上一个操作。
11)将吸附柱放入干净的1.5ml在离心管内，加30-50ul预热的ElutionBuffer，室温，放置2min，高速离心1min。
12)电泳检查样品：1%琼脂糖凝胶电泳，上样量为2ul，在紫外线下观察，最明亮的带是超螺旋，可以在一定程度上说明提取颗粒的纯度。
3.质粒的净化
1)将之前提取的质粒放入1.5ml3/10体积加入离心管mol/L无菌乙酸钠溶液。
2)加入2倍体积的无水乙醇，放置在-20℃沉淀4-6h或过夜。
3）4℃，高速离心机14000rpm，离心20min.
4)放弃上清，70%酒精洗两次。
5)空气干燥，可放置超净工作台干燥。
6）加200ul无菌水溶液干燥后得到沉淀，即质粒溶液。
7)紫外分光光度计测量质粒浓度和产量。
测量OD260和OD280的值：质粒DNA浓度=OD260×50×稀释倍数（μg/mL）。
10个常见问题
一.时间控制问题
裂化时间过长，加入溶液P2后裂化时间不得超过5分钟；吸附时间不足；溶解时间不足会导致质粒DNA提取试验失败。
二.大肠杆菌老化
建议涂层平板培养后再选择新菌体进行液体培养。
三.低质粒拷贝数
使用低拷贝数媒介引起的质粒DNA提取量低，可更换相同功能的高拷贝数媒体。
四.溶液使用不当
溶液P2.P3温度较低时可能出现混浊，应置于37℃保温片刻，直到溶解成清澈的溶液。
五.吸附柱过载
不同产品不同产品中的吸附能力不同。如果需要提取的质粒量很大，请分数次提取。如果使用聚集培养液，如聚集培养液，TB或是×YT必须减少菌液体积；如果质粒或宿主菌的拷贝数或生长率非常高，则需要调整LB培养液体体积。
六.质粒没有完全溶解
溶解质粒洗脱时，可适当加热或增加溶解时间。
七.酒精残留
漂洗液清洗后，尽量离心去除残留液体。树脂试剂盒漂洗后，树脂应干燥，然后倒入洗涤缓冲液中。
八.洗脱液位置不正确
洗脱液应加入硅胶膜中心，以确保洗脱液完全覆盖硅胶膜表面，达到最大的洗脱效率。
九.洗脱液不适合
DNA只能在低盐溶液中洗脱。洗脱效率取决于洗脱效率。pH值。最大洗脱效率在pH7.0～8.5间房间。用水洗脱时，其用水洗脱。pH如果值在这个范围内pH洗脱的概率太低。洗脱时，将杀菌蒸馏水或洗脱缓冲液加热至60%℃后用有利于提高洗脱效率。
十.洗脱体积太小
洗脱体积对来回收率