一.无菌操作是什么？

无菌操作法是在特定的无菌条件下进行的一种技术操作。操作中使用的所有原料.辅料.电器应提前灭菌，对室内空间的无菌性和操作人员的卫生有严格要求，工作应在无菌室进行。制备注射剂.输液.滴眼液.手术中使用透析液.创伤.粘膜的制剂.粉针用于注射.水针剂.无菌粉灌装.无菌原料药.培养基灌装等均应采用无菌操作。.无菌操作控制要点：

5M+EMan人员、人员动作.行为.活动.操作手法等。Machine机器-设备、设备的清洁消毒.安装调试准备等。Material物料-物料-物料传递.检查控制无菌物料.用器具灭菌等。

三.培养基罐装无菌生产能力的证明

1.概念：培养基灌装试验的目的是用无菌培养基代替生产线上的实际产品，挑战无菌生产过程.系统.工艺.程序和操作人员。

2.参考标准：ISO13408,“医疗卫生产品无菌工艺-部分1：常规要求”中国GMP现行版无菌附录中国GMP美国培养基罐装指南FDA-工业无菌工艺药品生产无菌产品指导-GMP现行版

3.接受标准:可接受水平:未发现污染培养基，本次验证成功。对于一小批量，用于培养基灌装的容器数量至少等于产品批量。目标是零生长。如果出现两种染色细菌，应重新验证并调查原因。

4.考虑因素：

（1）人员应充分考虑人员及其活动对无菌生产过程的风险，如模拟生产过程的最大人数，当操作人员减少可能导致其他污染风险增加时，这些条件也被视为最坏的条件之一。

（2）某些设备的无菌安装，如灌装机，在使用前需要手动安装。在这个阶段，设备表面污染的可能性远远大于无菌灌装期。因此，无菌安装阶段应是培养基罐的关键过程步骤。

(3)工艺时间应考虑模拟实际生产操作过程中的设备设施.分装器具.最终容器消毒或灭菌后放置的最长时间和工艺保留时间，如：设备设施.分装容器.灭菌后无菌器具的最长放置时间.混合粉末或分装前的等待期；模拟试验挑战的最坏环境应考虑单批产品无菌生产周期末端的选择.空调系统重新开启后或连续生产期间周期性灭菌的最长时间间隔。

（4）灌装速度模拟试验应涵盖产品的实际灌装速度范围，从无菌风险的角度分析和评价灌装速度对工艺过程等方面的影响，如最慢的灌装速度.最大容器用于模拟最长暴露时间，或最快灌装速度.最小容器用于模拟最大操作强度/难度。

（5）当容器规格的灌装线上有各种规格的容器时，应进行风险评估，选择模拟容器。一般选择最小、/或最大的容器进行培养基灌装模拟试验。

（6）灌装体积工艺模拟通常不需要达到正常的灌装体积，但应包括模拟和调整装载体积的过程。不同的灌装体积也会导致灌装时间的变化。灌装体积应符合两个标准：一是灌装培养基足够，通过旋转接触瓶壁和密封面；其次，培养基的体积应足以支持微生物的生长。

（7）灌装批量模拟灌装数量与实际批量生产密切相关。对于大批量产品，灌装数量应保证评价数据的有效性；对于批量产量小于5000的产品，模拟灌装数量应至少等于最大的实际产品。

（8）在日常生产中，对微生物污染事件制定了纠正措施。